Standart Hazırlık:
10 mL'lik bir volümetrik şişeye, her kavalakton referans standardının yaklaşık 10 mg'ı (± 0.01 mg) tam olarak tartılarak karışık bir stok standardı hazırlayın. 7.0 mL metanol ekleyin ve çözülene kadar sonat. Metanol ile hacme seyreltin ve karıştırın.
Bilgi: Alternatif olarak, benzer şekilde bir kavain stoğu standardı hazırlayın ve buna karşı nicelemek için kavalakton tepki faktörlerini kullanın.
Minimum dört noktalı standart bir eğri oluşturmak için stok standardını seyreltin. Stokta önerilen standart dilüsyonlar metanol kullanılarak 1:10, 1:25 ve 1: 100'dür.
Bilgi: Standartları soğuk havalarda (0 - 5 ° C) saklayın. Kavalaktonlar 48 saat sonra hızlı bir şekilde bozulur. Her analizden önce yeni referans standartlarının hazırlanması önerilir.
cihaz
· ± 0.01 mg'a kadar kalibre edilmiş analitik terazi
· Şişe, hacimsel, Sınıf A, çeşitli ebatlar
· Şişeler, kapaklı kromatografi
· USP bölümünde tarif edildiği gibi Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografi Sistemi. Cihaz, yazılım ve alt sistemlerin Kurulum Yeterlilik / İşlem Yeterlilik (IQ / OQ) performans gereksinimlerini karşıladığını doğrulayın ve belgeleyin.
· Filtre, 0.45 um, Gelman Acrodisc naylon (P / N 4426), Whatman Puradisc ™ Polipropilen (Kat. No. 6788-2504), Whatman GD / X Cam (Kat. No. 6894-2504) veya eşdeğeri Sonikator
· Kolon, YMCbasic, 5 um, 4.6 x 250 mm (Kat. No. BA99S05-2546WT). Eşdeğer kolon, YMC J'Shere H80, 4µ, 4.6 x 250 (Kat. No. JH08S04-2546WT).
Reaktifler
· Su, HPLC derecesi veya Nanopure
· Metanol, HPLC derecesi
· Asetonitril, HPLC derecesi
· Fosforik Asit, ACS Reaktif sınıfı
Örnek hazırlama:
Bitki materyali
Doğru olarak yaklaşık 750 mg ince öğütülmüş gövde, soyma veya kök materyali tartın (± 0.1 mg).
Malzemeyi, 40 ml metanol / su (70/30) ile birlikte 50 ml'lik hacimsel bir şişeye yerleştirin. Oda sıcaklığında 60 dakika sonikasyon.
Şişenin oda sıcaklığına soğumasına izin verin ve metanol / su (70/30) ile hacme seyreltin ve karıştırın.
Süzün ve numuneyi bir HPLC flakonuna ve kapağına yerleştirin.
Toz ve Yumuşak Ekstrakt (Macun)
50 mL'lik hacimsel bir şişeye doğru şekilde (± 0.1 mg) yaklaşık 100 mg ekstrakt tartılır. (100 mg ağırlık, ekstredeki% 50-60'lık bir kavalakton içeriğine dayanmaktadır.) Dikkat: Numune almadan önce ekstraktı dikkatlice homojenize edin. Bu, ekstraktı serbest akana kadar 60 ° - 80 ° C sıcak su banyosuna batırılmış bir kaba yerleştirerek gerçekleştirilir.
40 mL metanol ilave edin ve 10 dakika boyunca veya bütün katı maddeler çözülene kadar sonikasyon yapın.
Şişenin oda sıcaklığına soğumasına izin verin ve metanol ile hacme seyreltin ve karıştırın.
Süzün ve numuneyi bir HPLC flakonuna ve kapağına yerleştirin.
Toz örnekleri
Kava özü, sıklıkla çeşitli taşıyıcılara karıştırılır veya püskürtülür. Toz numunelerinin başarılı bir şekilde denenmesi için, kavalaktonları taşıyıcıdan geri alan bir numune hazırlama aşaması geliştirmek gerekir. Bu, önce saf metanol veya su ile özütleme yoluyla gerçekleştirilebilir.
Kromatografik Koşullar:
Kolon: YMCbasic, 5 µm, 4.6 x 250 mm
Kolon Sıcaklığı: 40 ° C
Akış Hızı: YMCbasic için 0.6 mL / dak; J'Sphere için 1.0 mL / dak
Mobil Faz: izokratik% 0.1 fosforik asit: izopropil alkol: asetonitril (64:16:20 h / h)
Algılama: 220 nm (seçiciliği artırmak için alternatif olarak 246 nm)
Enjeksiyon Hacmi: 5 µL
Çalışma Süresi: 30 dakika
Prosedür:
Referans standart çözeltileri hazırlayın ve talimatlara göre numune hazırlayın.
Bir ekstraksiyon çözücüsünün tek bir enjeksiyonunu boş bırakınız.
Standart preparatların tek enjeksiyonunu yapın.
Standart konsantrasyonlara karşı standart tepe alanlarının doğrusallık grafiği oluşturun.
Tekli örnek preparat enjeksiyonları yapın.
Örnekteki kavalakton konsantrasyonunu hesaplayın.
Sistem uygunluk:
Doğrusal regresyonun korelasyon katsayısı .990.999 olmalıdır. Desmetoksiangonin ve yangonin tepe noktaları arasındaki çözünürlük ≥1.8 olmalıdır.
Shaanxi Y-Herb Biyoteknoloji A.Ş.